Test de leucemia e inmunodeficiencia felina

Virus de la Leucemia felina (FeLV)

Es un gammaretrovirus responsable de la aparición de enfermedades no neoplásicas como anemia no regenerativa, inmunosupresión y neoplásicas como linfomas, leucemia y trastornos mieloproliferativos. La prevalencia es muy variable dependiendo de la zona o núcleo de población estudiado (albergues, gatos de ciudad...)

Patogénesis

Adsorción vírica a la superficie de la célula diana.
Fusión de la envuelta vírica con la pared celular y liberación de la nucleocápside con ARN vírico.
El ARN vírico se transcribe a ADN por acción de la transcriptasa inversa. El ADN vírico es transportado al núcleo celular donde se integra. Se forma así el PROVIRUS.
Durante la mitosis celular, las células hijas heredan el provirus (ADN vírico integrado). Por ello las infecciones por retrovirus son de por vida.
Producción de nuevas partículas víricas: El ADN integrado, produce ARNm, proteínas de la cápside (gag y pol) y ARN de nuevas partículas. El virión se ensambla bajo la membrana celular donde se encuentran proteínas de la envuelta necesarias para su salida de la célula por gemación.Este proceso no conlleva muerte celular.

Diagnóstico

Pruebas diagnósticas. En FeLV las proteínas internas son muy inmunógenas y antigénicamente idénticas para todos los subgrupos de FeLV. La proteína de la cápside vírica gag, p27, se sintetiza en gran cantidad y se encuentra tanto en el citoplasma celular como en el medio extracelular como antígeno libre.

ELISA. Detecta antígeno vírico extracelular libre en plasma (proteína de la cápside vírica p27). Tiene alta sensibilidad (90%) y alta especificidad.
Un positivo por si solo no tiene por qué indicar viremia persistente.
IFD (Inmunofluorescencia Directa). Detecta antígeno vírico intracelular p27 en el citoplasma de neutrófilos y plaquetas de sangre y médula ósea. Los neutrofilos y las plaquetas se liberan infectados a sangre desde la médula osea invadida por el virus.

Necesita sangre entera con anticoagulante y refrigerada, o bien se remite frotis de sangre entera.

Un positivo indica viremia persistente.

Falsos negativos: gato virémico con leucopenia (neutropenia y trombocitopenia) donde sólo un pequeño porcentaje de leucocitos periféricos están infectados
PCR. Sobre células mononucleares de sangre periféricay médula ósea.
- Real time PCR DNA. Detecta y cuantifica el número de copias de Provirus (DNA vírico integrado en célula).
  
  Detecta viremia persistente (ELISA+, RT-PCR+) y virus latente (ELISA -, RT-PCR +).
  
  Especificidad: muy alta.
  
  Necesitan un buen laboratorio.
- Real time PCR ARN. Permite la cuantificación de virus sin necesidad de células. Se realiza sobre sangre entera, suero, plasma, saliva, heces.
  
  Demuestra viremia al detectar ARN vírico pero no detecta latencia ya que estos gatos no producen RNA detectable en plasma, saliva o heces.
  
  Es de utilidad en colonias para detectar positivos en gatos poco manejables utilizando saliva, ya que es muy sensible.

Patogenia e interpretación de resultados

Se produce Infección oronasal mediante contacto con saliva, heces, leche, orina y secreción nasal.

Ocurre replicación en tejido linfático local y área orofaríngea.

Gatos inmunocompetentes. Gracias al sistema inmune mediado por células el virus se elimina completamente. El virus en ellos nunca se disemina sistémicamente y no se detecta la infección ya que no hay antígeno.
Gatos no inmunocompetentes. El virus se replica en linfocitos y monocitos y se disemina por todo el organismo: VIREMIA PRIMARIA. El gato se encuentra mal, con fiebre y linfadenopatía. El virus se disemina al timo, bazo, nódulos linfáticos y glándulas salivares por lo que es infeccioso. Esta fase dura entre 3 y 16 semanas y en algunas ocasiones hasta un año.

Viremia primaria. El gato se encuentra mal, con fiebre y linfadenopatía. El virus se disemina al timo, bazo, nódulos linfáticos y glándulas salivares por lo que es infeccioso. Esta fase dura entre 3 y 16 semanas y en algunas ocasiones hasta un año.

Viremia primaria. ELISA+, IFD-, RT-PCR+

Tras la viremia primaria

VIREMICO TRANSITORIO o REGRESOR. El sistema inmune puede eliminar el virus antes de que éste llegue a Médula Osea. Ocurre en el 30-40% de los gatos infectados. Desarrollan respuesta inmune eficaz por neutralización con anticuerpos que le protege frente a futuras infecciones pero no tiene una duración de por vida. Se deberán vacunar anualmente de leucemia felina para aumentar su inmunidad natural.

Virémico transitorio (pruebas en sangre): 1° ELISA+ , RT-PCR+ y tras meses del primero se hace el 2° ELISA-, RT-PCR-, IFD-
VIRéMICO PERSISTENTE (viremia secundaria). El sistema inmune NO puede eliminar el virus, y éste llega a Médula Osea (ocurre en un 30 - 40% de los gatos infectados). Las células hematopoyéticas producen granulocitos y plaquetas infectadas que circulan por el cuerpo. El virus se encuentra integrado en el DNA celular en forma de provirus, por lo que la división celular resulta en células hijas que también contienen virus. Esta es la causa de que se mantengan durante años en el gato tras la invasión de la médula ósea. Para eliminar la infección todas las células deberían ser detectadas y eliminadas, pero eso supondría la eliminación de todo el pool hematológico y del sistema inmune. La viremia es máxima con niveles altos de virus (1 ml. de saliva con 1 millón de virus).

Tras la invasión de la médula osea:

Desaparece la viremia, pero la médula persiste infectada. PORTADOR LATENTE EN MEDULA OSEA: La viremia desaparece, pero no así el virus del organismo, ya que se encuentra integrado en el DNA de algunas células de la médula ósea en forma de PROVIRUS DNA. En estos gatos no se producen copias víricas libres ya que la información del DNA no se transfiere a producción de proteínas víricas. La división de esas células producirá nuevas células con PROVIRUS pero no se producen copias víricas. Ocurre en un porcentaje bajo de gatos y cuanto más tiempo permanece la viremia 2° menos probable es que esto suceda.

ELISA- (No encuentra antígenos de la cápsula).

IFD- (No puede encontrar antígenos de la cápsula).

RT-PCR- (sangre).

RT-PCR+ (médula).

No son infecciosos. Pero la Infección latente se puede reactivar ante inmunosupresión y estrés intenso como el producido durante la preñez y durante lactación donde puede aparecer viremia eliminación de virus por saliva y leche. Pero cuanto más tiempo transcurra entre infección latente y posible inmunosupresión o estrés, menos probable será la reactivación ya que se producen errores en el material genético vírico y no es posible producir proteínas víricas viables.

Se cree que la latencia puede ser un método de eliminación del virus.

¿Produce sintomatología un virus latente en médula osea?. Puede originar mielosupresión o malignidad hematopoyética debido a que FeLV se puede integrar en lugares del genoma responsables de la regulación correcta de la división celular. Puede que el provirus integrado altere la función celular y contribuya a la patogénesis de la mielosupresión.
OTROS TIPOS DE LATENCIA. Debido a la realización cada vez más frecuente de RT-PCR, se ha observado que un 10% de las muestras de sangre resultan RT-PCR + pero ELISA -. Son PORTADORES LATENTES y es más frecuente de lo que se creía. La causa está en que un sistema inmune eficaz que consiga eliminar la viremia, no es capaz de eliminar completamente el virus de todas las células del cuerpo.

En un estudio reciente (Dr.Hans Lutz, Universidad de Zurich, ESFM Feline Crongress 2008) se ha observado que esto ocurre tanto en gatos no vacunados como vacunados con posterior exposición al virus de leucemia. Ninguna vacuna utilizada en el estudio era capaz de proteger de la integración del virus como provirus en células y de una mínima replicación, pero si de la viremia. Este provirus puede permanecer durante años y la reactivación puede ocurrir pero el riesgo es muy bajo.

Muestra de sangre: ELISA-, RT-PCR ADN+, RT-PCR ARN+ (pero muy bajo número de copias)

Nota: RT-PCR ARN es capaz de detectar FeLV en un número pequeñisimo de células, al ser más sensible que ELISA.

¿Qué efectos clínicos puede tener?: Se han encontrado provirus en células tumorales de gatos FeLV negativo (ELISA), por lo que puede estar involucrado en la patogénesis del tumor.
GATOS DISCORDANTES. El virus no permanece en médula ósea ni en sangre, sino en otros órganos donde se replica de forma intermitente o permanece latente en vejiga, ojos, tejido mamario. Ocurre en un 5% de los gatos y explica resultados discordantes o alternancia de ELISA positivos y negativos. Puede haber madres que transmitan infección a sus hijos a través de la leche, pero que ellas resulten negativas.

Pruebas en sangre: ELISA+ varible (al eliminarse p27 a la circulación de forma intermitente), PCR -.

Virus de la Leucemia felina (FeLV)

Es un retrovirus del género Lentivirus, responsable de la aparición de cuadros de SIDA (Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirido) como consecuencia de la muerte de linfocitos T CD4+. En esta fase sobreviene la muerte debido al desarrollo de un síndrome crónico de consunción (pérdida de peso y deterioro físico), enfermedad neurológica, neoplasia y/o infecciones oportunistas sistémicas.

Existen 5 subtipos genéticamente distintos en todo el mundo: A, B, C, D y E:

Los subtipos identificados más frecuentemente son el subtipo A y B.
En Europa se ha observado mayoritariamente el subtipo A y B.
En Estados Unidos, el subtipo A es el predominante excepto en la costa este, que es el B, pero también están presentes lo otros subtipos.
Un mismo gato puede ser infectado por varios subtipos.

Patogénesis

Adsorción vírica a la superficie de la célula diana.
Fusión de la envuelta vírica con la pared celular y liberación de la nucleocápside con ARN vírico.
El ARN vírico se transcribe a ADN por acción de la transcriptasa inversa. El ADN vírico es transportado al núcleo celular donde se integra. Se forma así el PROVIRUS.
Durante la mitosis celular, las células hijas heredan el provirus (ADN vírico integrado). Por ello las infecciones por retrovirus son de por vida.
Producción de nuevas partículas víricas: El ADN integrado, produce ARNm, proteínas de la cápside y ARN de nuevas partículas. El virión se ensambla bajo la membrana celular donde se encuentran proteínas de la envuelta necesarias para su salida de la célula por gemación. Este proceso no conlleva muerte celular.

Fases de la enfermedad

Fase de viremia. En esa fase se produce la replicación del virus en ganglios regionales y una posterior viremia. Aparecen signos inespecíficos de anorexia, letargia, linfadenopatía y leucopenia transitoria.
Fase asintomática o de latencia clínica. En esta fase no hay signos de enfermedad ya que la carga viral se reduce pero la viremia no desaparece. La infección viral progresa durante este periodo sufriendo el sistema inmune una disminución progresiva del cociente T CD4/CD8.
Fase de inmunodeficiencia. En esta fase se produce una dismisnución severa del cociente de linfocitos T CD4+/ CD8+ y una alteración de su función dando lugar al desarrollo del Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirido (SIDA).

Diagnóstico

ELISA Detecta anticuerpos anti-FIV contra tres proteínas estructurales del virus: p15 y p24 (proteínas de la nucleocápside) y gp40 (glicoproteína de la envoltura) en suero, plasma o sangre entera.

Tiene alta sensibilidad del 99.3% y alta especificidad 99.8%.

Falsos positivos si:
- Detecta anticuerpos vacunales, por lo que no debe utilizarse en el caso de sospechar que un gato esté vacunado frente a FIV (Confirmar con PCR).
- Detecta anticuerpos maternales, por lo que en un gato menor de 8 meses pueden obtenerse falsos positivos (Repetir tras los 8 meses de vida y confirmar con PCR).
Falsos negativos si:
- Hay una carga viral escasa debido a una infección temprana (Confirmar con PCR).
- Secuestro de complejos inmunes debido a enfermedad inmunomediada (Confirmar con PCR).
- Inmunosupresión severa (Confirmar con PCR).

Western Blot. Detecta anticuerpos anti-FIV para cada proteína individual del virus, al separar éstas mediante electroforesis. Se realiza en suero, plasma o sangre entera

Es el gold-standard para el diagnóstico de la infección de FIV.

Falsos positivos si:
- Detecta anticuerpos vacunales, por lo que no debe utilizarse en el caso de sospechar que un gato esté vacunado frente a FIV (Confirmar con PCR).
- Detecta anticuerpos maternales, por lo que en un gato menor de 8 meses pueden obtenerse falsos positivos (Repetir tras los 8 meses de vida y confirmar con PCR).
Falsos negativos si:
- Hay una carga viral escasa debido a una infección temprana (Confirmar con PCR).
- Secuestro de complejos inmunes debido a enfermedad inmunomediada. (Confirmar con PCR).
- Inmunosupresión severa (Confirmar con PCR).

PCR. Sobre cualquier tejido. Las diferentes técnicas de PCR disponibles (rtPCR, RTPCR, PCR anidada, PCR convencional) permiten detectar el subtipo A, pero el resto de subtipos son detectados de forma más variable.

Falsos positivos si:
- La vacunación de gatos frente a FIV, puede aumentar el número de falsos positivos pero se desconocen las causas ya que la vacuna se supone que no debe provocar replicación vírica.
- Contaminación del PCR con pruebas anteriores en laboratorios no cuidadosos (Repetir y confirmar con Western Blot).
Falsos negativos si:
- En el caso de realizarlo en la fase asintomática con una reducida carga viral, puede obtenerse un falso negativo dependiendo de la sensibilidad de la técnica (Buscar laboratorios con una elevada calidad y confirmar con Western Blot siempre tras los 8 meses de vida).
- Un transporte inadecuado de la muestra puede dar lugar a falsos negativos al degradarse el ac. Nucléico (Confirmar con Western Blot siempre tras los 8 meses de vida).
- El PCR no está detectando el subtipo viral. (Pedir al laboratorio que especifique qué subtipo detecta su PCR y pedir PCR para el resto de subtipos y confirmar con Western Blot siempre tras los 8 meses de vida)

Tratamiento FeLV/ FIV

Hasta el día de hoy no existe un tratamiento curativo para esta enfermedad, sólo se pueden utilizar tratamientos paliativos que aumenten la calidad y esperanza de vida.

Tratamiento precoz, agresivo y más duradero de complicaciones bacterianas, parasitarias... a las que son más susceptibles debido a la inmunosupresión que padecen aunque no sea detectable ya que la respuesta inmune mediada por anticuerpos está afectada en todos los gatos infectados por FeLV.
Tratamiento de linfoma con tratamiento quimioterápico específico. Puede dar supervivencias de hasta dos años en algunos gatos.
Antiviarles:

AZT. Bloquea la transcriptasa inversa. Sólo en infección temprana (en las tres primeras semanas tras infección) se ha observado en estudios experimentales que evita la llegada del virus a médula ósea. En infecciones naturales sin embargo, no se obtienen tan buenos resultados como en el tratamiento de FIV donde consigue reducciones en el título viral en plasma.

Mejora el estado clínico y la calidad de vida, mejorando la esperanza de vida en algunos gatos.
- Dosis: 5-10 mg/kg cada 12 horas oral en ciclos de 6 meses continuado o bien 6 meses alternos (descansos de un mes).
- Efectos secundarios sobre todo en la dosis mayor: Anemia no regenerativa es un efecto secundario frecuente. Hay que hacer analíticas semanales.
- Si el Ht llega a un 20% hay que parar el tratamiento. La anemia se recuperará en unas semanas.
- Si durante las primeras 4 semanas no hay anemia, hacer analíticas una vez al mes.
- No tratar a gatos con anemia por aplasia medular.
- Otros efectos como vómitos y anorexia se presentan de forma muy esporádica.
- Otros antivirales inhibidores de la transcriptasa (STAMP, PMEA 9, AMD3100), inhibidores de proteasa, Ac. Valproico y Lamiduvide han mostrado eficacia variable, algunos son tóxicos y muchos de los tienen una disponibilidad limitada en medicina veterinaria.
Inmunomoduladores:
- Interferón omega felino: mejora la sintomatología clínica y aumenta la vida, pero no ayuda a revertir la viremia. El protocolo en cuadros de anemia e Inmunosupresión recomendado por el laboratorio es de 1 MU/kg/sc durante 5 días. Esperar 14 días y repetir hematología. Si se han recuperado los valores repetir el ciclo 5 días más. Repetir el ciclo en recaídas. No tiene efectos secundarios.

Manejo de gatos FeLV + y FIV +

De los gatos que conviven con el positivo:

Testar a todos los gatos de casa.
Informar del riesgo para los gatos negativos y de que lo mejor para no infectar es aislarlos.
Esterilizar a todos los gatos.
No introducir a nuevos gatos.
El riesgo para los gatos que ya vivían con un FELV + no es muy alto ya que han sido infectados antes y pueden ser inmunes para una nueva infección. Se estima que el riesgo es de un 10-15% si es FeLV- habiendo vivido con el FeLV+ durante varios meses.

De todos modos, la neutralización de virus por anticuerpos no es duradera de por vida, por lo que un gato que inicialmente es inmune, con los años puede llegar a infectarse.

El virus FIV se transmite básicamente por mordeduras o heridas en peleas, por lo que la probabilidad de transmisión dentro de grupos estables y pacíficos es prácticamente nula.
Se deberá vacunar anualmente de leucemia felina para aumentar la inmunidad natural y prevenir de que la vacuna no protege al 100%.
Controlar bien a otros gatos enfermos para que no contagien al gato infectado por FIV.
Evitar corticoides en gatos negativos que conviven con positivos a FeLV ya que hay riesgo de reactivación de infección latente.

Del gato infectado:

No debe salir a la calle para no diseminar la infección.
Mantener una buena nutrición y evitar carnes crudas por riesgo de contagio de Toxoplasma.
Mantener programa de vacunación para prevenir infecciones. Se ha comprobado que su sistema inmune no responde tan eficazmente como un gato libre de infección vírica ante la vacunación de rabia.
Desparasitar interna y externamente.
Revisiones cada 6 meses para curar cualquier posible patología de forma temprana: hacer analítica de sangre, radiografía, ecografía, analítica de orina. Revisar frecuentemente la boca para evitar infecciones crónicas orales.
Pesar rutinariamente ya que la pérdida de peso es indicativo de enfermedad aunque no se detecte otro signo.